蛛网膜下腔出血

蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）指脑底部或脑表面的病变血管破裂，血液直接流入蛛网膜下腔引起的一种临床综合征，又称为原发性蛛网膜下腔出血，约占急性脑卒中的10%，是一种非常严重的常见疾病。还可见因脑实质内，脑室出血，硬膜外或硬膜下血管破裂，血液穿破脑组织流入蛛网膜下腔，称为继发性蛛网膜下腔出血。

造模材料

SPF级SD大鼠，健康，6~8W，雄性，体重为180g-200g。

造模过程

大鼠称重后以10%水合氯醛按0.4g/kg腹腔麻醉，麻醉成功后剃除颅顶部毛发，取俯卧位，将动物头部固定于脑立体定位仪上，保持颅顶水平位置。手术区常规消毒，沿颅顶正中矢状线切开长约2cm皮肤，钝性分离肌肉及骨膜，双氧水消毒及止血，在距前囱正中线前6mm、中线旁开2~3cm处，用5mL注射器针头钻孔，手术显微镜下用4号针头小心将脑膜挑破，见清亮脑脊液流出时，在矢状面将导管向前倾斜30°插入，直至尖端达前颅窝底，深度距大脑表面约1.0cm。骨孔用骨蜡密封住。连接注射器轻柔抽吸，见清亮脑脊液流出后，证实进入蛛网膜下腔。局部消毒后剪除长约2cm鼠尾，快速接取鼠尾动脉血300μL，用微量注射注入蛛网膜下腔，注射时间为20s。拔出导管，医用生物胶封闭骨孔，逐层缝合皮肤，放入保暖箱内。大鼠麻醉苏醒后放回饲养箱饲养并观察。

模型验证

1 、大体观察：观察各组大鼠脑表面周围的积血/血凝块情况。

2 、神经认知功能评分：分别于损伤后48h，参照Kaoutzanis等的行为学评分：

自由进食2分，拒绝进食1分；

运动反应：自由行走5分，行走困难4分，不能行走3分。

刺痛时肢体收缩2分，刺痛时无反应1分；

睁眼反应：自行睁眼4分，声音刺激睁眼3分，刺痛睁眼2分，不能睁眼1分。总分11分。

3 、生理学检测：测定血脑屏障的变化。

血脑屏障渗透性测定：

⑴ 脑组织中伊文氏蓝（EB）含量的测定参照周永刚等方法，首先建立标准回归曲线，取EB 10mg溶于100ml生理盐水中，取0.1ml加入1.9ml甲酰胺中混匀作为第一管，再从中取0.1ml加入1.9ml甲酰胺中混匀作为第二管，依次取1ml加入1ml甲酰胺中混匀作为第三管，类推并共做6管，37℃水浴48h，采用荧光分光光度仪610nm进行比色，蒸馏水做空白。按公式计算脑组织EB含量：脑组织EB含量（μg/g脑组织）：A×甲酰胺量（mL）÷脑湿重（g）（A为根据标准曲线回归方程，求得的样品EB含量，单位为ng/mg）。

⑵ 各组大鼠于处死前1h经股静脉注射2%伊文氏蓝（EB）2ml/kg，为清除血液中染料，用穿刺针向左心室关注生理盐水，直至右心室流出清澈透明液体为止，开颅快速切取大鼠颞底皮层脑组织称重。将样品放入盛有50%三氯乙酸（TCA）溶液1.5ml的匀浆器中，匀浆和离心（10000r/min，20min），取上清液1.0ml，放入1.5ml混合液（50%TCA和无水乙醇按1:3比例配制而成），充分混匀。检测。

组织病理学：

4 、HE染色：

在SD大鼠成功建模48h后，给予10%水合氯醛进行腹腔注射麻醉（3-4ml/kg），立即进行断头取脑组织，取血凝块周围的脑皮层组织，用于观测各组老鼠脑组织损伤情况，切片进行全景扫描。

5 、免疫组化

取血凝块周围的脑皮层组织，使用MBL-C抗体检测，切片进行全景扫描。

6 、原位细胞凋亡检测TUNEL实验

取血凝块周围的脑皮层组织，检测各组大鼠蛛网膜下腔出血后组织细胞的凋亡情况。切片进行荧光全景扫描。

7 、WB检测蛋白质表达

取血凝块周围的脑皮层组织检测MBL-2、C3、TLR4、p65、p-p65表达水平。

交付流程：

前期沟通→方案评估→方案接收→支付预付款→项目进行→支付尾款→项目交付