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灌注取材
在神经生物学研究中,进行脑组织形态学观察如电镜、组织化学、原位杂交等实验时,为防止自溶,使组织与细胞保持其生活时或死亡时的形态结构,并保存其中要检测的化学物质,通常要对脑进行固定处理。最常用的方法是经心灌注固定。
一、实验步骤
1.Wistar大鼠250~300g左右,10%水合氯醛按4mL/kg 经腹腔注射麻醉。仰卧位固定于手术台上。
2.开胸:用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀在剑突下剪一小口,止血钳夹持剑突上提,在剑突两侧2cm处向上剪断肋骨至下颌,上翻胸廓,暴露心脏。
3.心脏左心室穿针:自心尖处插入灌注针至升主动脉,并用止血钳夹住。剪开右心耳。止血钳夹闭腹主动脉。
4.生理盐水冲洗 用针管抽取生理盐水通过灌注针注入心脏,直到大鼠两前肢及两肺变白为止(约100mL)。
5.4%多聚甲醛固定: 将灌注针与置于高处的多聚甲醛输液瓶相接,通过重力作用继续灌注。刚开始灌注时大鼠前肢剧烈抽动(下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全),待前肢及颈部僵硬时,说明固定效果良好,灌注的脑组织白而硬。
6.取脑 沿颅后与颈椎之间断头,沿颅顶正中切开头皮去除软组织,用止血钳自枕骨大孔处渐次去除颅顶骨,充分暴露脑,剪断脑神经,取出完整脑。
7.解剖观察或切片 进行大体观察,可解剖海马、纹状体等结构。或者将取出的脑置于30%蔗糖缓冲液,4℃冰箱内保存,将来作冷冻切片。
二、观察项目
观察灌流后的脑组织是否完整,血管内是否还残留血液,颜色是否洁白并且具有一定的硬度。
交付流程:
前期沟通→方案评估→方案接收→支付预付款→项目进行→支付尾款→项目交付