灌注取材

在神经生物学研究中，进行脑组织形态学观察如电镜、组织化学、原位杂交等实验时，为防止自溶，使组织与细胞保持其生活时或死亡时的形态结构，并保存其中要检测的化学物质，通常要对脑进行固定处理。最常用的方法是经心灌注固定。

一、实验步骤

1．Wistar大鼠250～300g左右，10％水合氯醛按4mL/kg 经腹腔注射麻醉。仰卧位固定于手术台上。

2．开胸:用左手持镊子夹起腹部皮肤，右手持剪刀在剑突下剪一小口，止血钳夹持剑突上提，在剑突两侧2cm处向上剪断肋骨至下颌，上翻胸廓，暴露心脏。

3．心脏左心室穿针:自心尖处插入灌注针至升主动脉，并用止血钳夹住。剪开右心耳。止血钳夹闭腹主动脉。

4．生理盐水冲洗 用针管抽取生理盐水通过灌注针注入心脏，直到大鼠两前肢及两肺变白为止（约100mL）。

5．4%多聚甲醛固定: 将灌注针与置于高处的多聚甲醛输液瓶相接，通过重力作用继续灌注。刚开始灌注时大鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全），待前肢及颈部僵硬时，说明固定效果良好，灌注的脑组织白而硬。

6．取脑 沿颅后与颈椎之间断头，沿颅顶正中切开头皮去除软组织，用止血钳自枕骨大孔处渐次去除颅顶骨，充分暴露脑，剪断脑神经，取出完整脑。

7．解剖观察或切片 进行大体观察，可解剖海马、纹状体等结构。或者将取出的脑置于30％蔗糖缓冲液，4℃冰箱内保存，将来作冷冻切片。

二、观察项目

观察灌流后的脑组织是否完整，血管内是否还残留血液，颜色是否洁白并且具有一定的硬度。

交付流程：

前期沟通→方案评估→方案接收→支付预付款→项目进行→支付尾款→项目交付